衰老or老化
細(xì)胞衰老是指穩(wěn)定細(xì)胞周期停滯的狀態(tài)，在這種狀態(tài)下增殖細(xì)胞會(huì)對(duì)促生長刺激產(chǎn)生耐受，通常由 DNA 損傷所引起。Leonard Hayflick 首先描述了細(xì)胞衰老，他觀察到人類胎兒成纖維細(xì)胞最終會(huì)停止分裂，但在長時(shí)間培養(yǎng)后仍然具有活力和代謝活性。現(xiàn)在普遍認(rèn)為，除了具有干細(xì)胞樣特性的細(xì)胞類型外，只有轉(zhuǎn)化的惡性細(xì)胞會(huì)無限復(fù)制，而非轉(zhuǎn)化細(xì)胞則不會(huì)。除了在體外受控條件下發(fā)育的胚胎干細(xì)胞或誘導(dǎo)多能干細(xì)胞，此類細(xì)胞還包括內(nèi)源性生殖干細(xì)胞和成體干細(xì)胞。衰老細(xì)胞與靜息細(xì)胞和終末分化細(xì)胞均不同，其中靜息細(xì)胞能夠重新進(jìn)入細(xì)胞周期。
衰老細(xì)胞的特征是形態(tài)學(xué)和代謝變化、染色質(zhì)重構(gòu)、基因表達(dá)改變以及出現(xiàn)一種稱為衰老相關(guān)分泌表型 (SASP) 的促炎癥表型。衰老的生物學(xué)作用復(fù)雜，衰老細(xì)胞的保護(hù)作用和有害作用均已有描述，主要取決于生理環(huán)境。例如，盡管衰老可能作為避免受損細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的機(jī)制進(jìn)化而來，但衰老的發(fā)生可能會(huì)導(dǎo)致許多年齡相關(guān)病變，包括癌癥、組織退化和炎癥性疾病。
老化和細(xì)胞衰老這兩個(gè)術(shù)語不能互換使用。老化是隨時(shí)間推移的進(jìn)行性衰退，而衰老在整個(gè)生命周期中都可發(fā)生，包括胚胎發(fā)生期間。衰老細(xì)胞的數(shù)量隨著年齡增大而增加，但衰老還在發(fā)育以及傷口愈合中發(fā)揮重要作用。
老化是什么
老化是生命發(fā)展的必然，任何細(xì)胞從誕生之時(shí)起，老化過程就開始了。老化的細(xì)胞結(jié)構(gòu)蛋白、酶蛋白和受體蛋白合成減少，攝取營養(yǎng)和修復(fù)染色體損傷的能力均下降，表現(xiàn)為細(xì)胞和胞核變形，線粒體、高爾基體扭曲或呈囊泡狀，胞質(zhì)色素沉著，細(xì)胞體積縮小，由此導(dǎo)致器官重量減輕，間質(zhì)增生硬化，功能代謝降低，儲(chǔ)備功能不足。
肉眼顯微鏡下觀察細(xì)胞主要鏡下特征：
1、細(xì)胞內(nèi)部會(huì)出現(xiàn)空泡（可能是凋亡小體），也可能會(huì)出現(xiàn)黑點(diǎn)，大多沿細(xì)胞周邊排布，內(nèi)部中間也可能會(huì)顯現(xiàn)一些，但相對(duì)周邊為少。
2、老化以后的細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)形態(tài)的改變，立體感會(huì)慢慢消失，開始成扁平狀，細(xì)胞與細(xì)胞之間的間隔減小或混在一起，細(xì)胞不再是梭形，而會(huì)成為各種不規(guī)則形狀。
3、細(xì)胞折光性變差，鏡下可見細(xì)胞“變薄”，做轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)時(shí)，細(xì)胞死亡率會(huì)較高。但培養(yǎng)液不會(huì)發(fā)生迅速變黃的現(xiàn)象，仍清亮。
4、細(xì)胞的貼壁性減弱，開始有細(xì)胞漂浮于培養(yǎng)液中。
5、老化的細(xì)胞，表面分泌物會(huì)增多，細(xì)胞表面的純凈度越來越低。
6、分裂的細(xì)胞數(shù)量明顯地減少同時(shí)細(xì)胞的增殖速度也會(huì)大大下降。
7、細(xì)胞開始長角分化。
老化的原因
1、氧化應(yīng)激：由內(nèi)在或外在因素引起的氧化壓力會(huì)加速細(xì)胞老化。
2、端?？s短：端粒是染色體末端的保護(hù)結(jié)構(gòu)，其縮短會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞分裂次數(shù)有限，從而引發(fā)細(xì)胞老化。
3、細(xì)胞自噬功能降低：細(xì)胞自噬是細(xì)胞內(nèi)部清理和修復(fù)機(jī)制的一部分，功能降低會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞老化。
4、營養(yǎng)不足：培養(yǎng)液中的營養(yǎng)成分不足也會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞老化。
5、傳代次數(shù)過多：在體外培養(yǎng)過程中，細(xì)胞傳代次數(shù)過多或時(shí)間過長也會(huì)引起細(xì)胞老化。
如何預(yù)防細(xì)胞老化
1、不要等細(xì)胞長得太滿才傳代。細(xì)胞太密會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)下降，產(chǎn)生細(xì)胞接觸性抑制。一般密度到80-90%左右就可以傳代了。
2、細(xì)胞不要消化過度。采用胰蛋白酶消化細(xì)胞，會(huì)造成細(xì)胞表面一定程度的細(xì)胞損傷。一定要注意選用的胰酶品牌，使用的胰酶量，絕大多數(shù)細(xì)胞使用0.25胰酶含edta這款消化液，t25瓶1ml，培養(yǎng)箱消化1min即可拿出來在顯微鏡下看細(xì)胞脫落情況。
3、最重要的是使用優(yōu)質(zhì)的血清和培養(yǎng)基：干細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)基中的內(nèi)毒素非常敏感。除了要留意基礎(chǔ)培養(yǎng)基的內(nèi)毒素外，也要留意血清的內(nèi)毒素。如果血清中內(nèi)毒素≥3EU/ml時(shí)，干細(xì)胞很容易老化或死亡，導(dǎo)致細(xì)胞“亞健康”狀態(tài)，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)受到影響。很多使用者，在血清在試用前，就會(huì)通過提早審核該批次《檢測報(bào)告》，以決定是否入圍進(jìn)行試用。
4、在開始養(yǎng)細(xì)胞并傳代時(shí)，也要特別注意凍存細(xì)胞，以保持細(xì)胞有種子庫存在，可以有效避免細(xì)胞損傷
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