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BC-PC-HU-001-5×10?Cells

人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSC)

規(guī)格 5×10?Cells/T25瓶
  • 英文名:
  • BMSC
  • CAS號(hào):
  • 分子式:
  • 品牌:
  • Sbjbio
  • MDL:
  • 儲(chǔ)存條件:
產(chǎn)品編號(hào) 銷售價(jià)促銷價(jià) 庫(kù)存 數(shù)量 單位 加入購(gòu)物車
BC-PC-HU-001 ¥7500.00元 準(zhǔn)現(xiàn)貨 T25瓶 加入購(gòu)物車

商品描述

文獻(xiàn)引用

質(zhì)檢證書(COA)

相關(guān)商品

【貨號(hào)】 BC-PC-HU-001

【規(guī)格】 5*105個(gè)/T25培養(yǎng)瓶(常溫發(fā)貨

【保存】 液氮保存,長(zhǎng)期

【產(chǎn)品介紹】

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細(xì)胞簡(jiǎn)介

人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSC)分離自骨髓;骨髓是機(jī)體的造血組織,位于身體的許多骨骼內(nèi)。骨髓存在于長(zhǎng)骨(如肱骨、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中,是一種海綿狀的組織,能產(chǎn)生血細(xì)胞的骨髓略呈紅色,稱為紅骨髓。出生時(shí),紅骨髓充滿全身骨髓腔,隨著年齡增大,脂肪細(xì)胞增多,相當(dāng)部分紅骨髓被黃骨髓取代,最后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。骨髓基質(zhì)系統(tǒng)內(nèi)存在的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是一種除造血干細(xì)胞以外的、具有高度自我更新能力和多向分化潛能的干細(xì)胞,可以向骨、軟骨、肌組織、皮膚、脂肪、神經(jīng)等多種組織分化,因此可以作為組織工程中的種子細(xì)胞。在骨髓中,BMSC占骨髓有核細(xì)胞總數(shù)的0.001%~0.1%,含量極低。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)條件要求較高,在培養(yǎng)過(guò)程中,受貼壁時(shí)間、種植密度、血清含量、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)基pH值等條件的影響。

【收貨后處理】

T25培養(yǎng)瓶常溫運(yùn)輸細(xì)胞

根據(jù)不同細(xì)胞生長(zhǎng)特性,分為以下處理方式:

貼壁細(xì)胞:未超過(guò)80%匯合度時(shí),將培養(yǎng)瓶中的完全培養(yǎng)基收集至離心管中,留5mL完全培養(yǎng)基,放入37、5%CO2孵箱培養(yǎng);超過(guò)80%匯合度時(shí),依據(jù)生長(zhǎng)特性進(jìn)行傳代或凍存,具體操作見(jiàn)細(xì)胞傳代和凍存步驟。首次傳代,建議1:2傳代(兩個(gè)T25)。

懸浮細(xì)胞:將T25培養(yǎng)瓶中的懸液收集至離心管中1000rpm離心3~5min,丟棄上清,加1~2mL完全培養(yǎng)基重懸,按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代(兩個(gè)T25),補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至4~5mL/瓶,最后放入37、5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

半貼壁、半懸浮細(xì)胞:?對(duì)于半貼壁半懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞,懸浮細(xì)胞用離心管收集細(xì)胞懸液,1000rpm離心3~5min,丟棄上清。?貼壁的細(xì)胞未超過(guò)80%匯合度時(shí),用5mL完全培養(yǎng)基重懸收集到的細(xì)胞沉淀,然后加回原培養(yǎng)瓶中,放入37、5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。?貼壁的細(xì)胞超過(guò)80%匯合度時(shí),根據(jù)貼壁細(xì)胞傳代方法使用0.25%胰酶消化收集;將懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞的沉淀用1~2mL完全培養(yǎng)基重懸收集到一起,混勻后,按1:2進(jìn)行分瓶傳代(2個(gè)T25)。

運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶12傳代

【復(fù)蘇培養(yǎng)】

從液氮中取出細(xì)胞凍存管,快速將其置入37水浴中解凍,直至凍存管中無(wú)結(jié)晶,然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁;將凍存管中的細(xì)胞懸液移至含1mL完全培養(yǎng)基的15mL離心管中,1000 rpm離心3~5min

棄上清,用4~5mL完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀,接種至T25培養(yǎng)瓶,于37、5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),密切觀察細(xì)胞狀態(tài)。

【細(xì)胞傳代】 

細(xì)胞收集:?貼壁細(xì)胞:當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)至培養(yǎng)瓶或皿底面的80%以上匯合度時(shí),棄去培養(yǎng)瓶或皿中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次,然后添加適量的0.25%胰蛋白酶消化液至培養(yǎng)瓶或皿中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后,加入與胰蛋白酶消化液等量(或高于消化液的量)的完全培養(yǎng)基終止消化,再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15mL離心管中。?懸浮細(xì)胞:直接收集培養(yǎng)瓶或皿中的細(xì)胞懸浮液轉(zhuǎn)移至15mL離心管中。?半貼壁半懸浮細(xì)胞:先參考?收集懸浮細(xì)胞,再參考?收集貼壁細(xì)胞。

離心:收集好的細(xì)胞在1000rpm條件下離心3~5min,離心好后棄除上清液。

接種:根據(jù)細(xì)胞量以適量的完全培養(yǎng)液重懸細(xì)胞沉淀,之后按適當(dāng)比例接種到新培養(yǎng)瓶或皿中(細(xì)胞量及培養(yǎng)瓶或皿的規(guī)格可按實(shí)驗(yàn)要求確定)。 

【細(xì)胞凍存

細(xì)胞收集:?貼壁細(xì)胞當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)至培養(yǎng)瓶或皿底面的80%以上匯合度時(shí),棄去培養(yǎng)瓶或皿中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細(xì)胞一次,然后添加適量的0.25%胰蛋白酶消化液至培養(yǎng)瓶或皿中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后,加入與胰蛋白酶消化液等量(或高于消化液的量)的完全培養(yǎng)液終止消化,再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15mL離心管中。?懸浮細(xì)胞:直接收集培養(yǎng)瓶或皿中的細(xì)胞懸浮液轉(zhuǎn)移至15mL離心管中。?半貼壁半懸浮細(xì)胞:先參考?收集懸浮細(xì)胞,再參考?收集貼壁細(xì)胞。

離心:收集好的細(xì)胞在1000rpm條件下離心3~5min,離心好后棄除上清液。

凍存液重懸:可根據(jù)細(xì)胞量(需提前計(jì)數(shù))向沉淀細(xì)胞加入一定量的配制好的細(xì)胞凍存液(50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%胎牛血清+10%DMSO),混勻后以1mL/管加入凍存管中。

凍存:將凍存管放入裝有異丙醇的的凍存盒中進(jìn)行梯度降溫,然后放入-80冰箱降溫,24h后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐中。(若實(shí)驗(yàn)室條件不足,可于冰箱上層4放置30min,隨后轉(zhuǎn)移至下層-20冷凍2h,接下來(lái)將其放于-80超低溫冰箱中過(guò)夜,最終將凍存管放置于液氮中以長(zhǎng)期保存。

【售后依據(jù)】 

收到細(xì)胞后,請(qǐng)及時(shí)核對(duì)培養(yǎng)瓶上標(biāo)注的細(xì)胞名稱是否與訂購(gòu)的細(xì)胞名稱一致以及培養(yǎng)瓶是否有破損或漏液等異常情況,若有異常請(qǐng)及時(shí)拍照聯(lián)系我們。 

顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存(,10×20×各一張)前三天照片為重要售后依據(jù),不提供照片默認(rèn)收到狀態(tài)良好。

【注意事項(xiàng)】

1、收到細(xì)胞后,及時(shí)查看產(chǎn)品介紹,確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)特性,并按照不同生長(zhǎng)特性(貼壁、懸浮、半貼壁半懸浮)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行處理。

2、收到細(xì)胞后建議先不要打開(kāi)培養(yǎng)瓶蓋,75%酒精棉球擦拭T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶外部。將其放入37培養(yǎng)箱中靜置3~4h后,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

3、有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過(guò)程中可能會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下,可先離心培養(yǎng)瓶中的完全培養(yǎng)基收集脫落細(xì)胞,然后加入完全培養(yǎng)基重懸并吹散,加回原培養(yǎng)瓶并補(bǔ)齊培養(yǎng)液,再放到培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。

4、如收到密閉培養(yǎng)瓶,處理完后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)時(shí)要將培養(yǎng)瓶蓋子擰松。

5、所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全柜內(nèi)操作,并注意防護(hù)。所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需滅菌后方能丟棄。

6、若細(xì)胞在操作過(guò)程中發(fā)生污染,需對(duì)污染的細(xì)胞進(jìn)行滅活方可丟棄。

7、本庫(kù)的細(xì)胞系(株)僅用于科研工作,未經(jīng)許可不得用于其他目的,使用者不得將本庫(kù)細(xì)胞系(株)轉(zhuǎn)讓給第三者。

培養(yǎng)建議

1、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)條件要求較高,在培養(yǎng)過(guò)程中,受貼壁時(shí)間、種植密度、血清含量、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)基pH值等條件的影響。

2、人BMSC體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。

3、該細(xì)胞可傳代10代左右,6代以內(nèi)為最佳,建議收到細(xì)胞后盡快完成實(shí)驗(yàn)。

4、注意控制胰酶消化時(shí)間,長(zhǎng)時(shí)間消化會(huì)影響細(xì)胞貼壁及生長(zhǎng)狀態(tài)。-

收到貨后務(wù)必三天內(nèi)在4×,10×,20×倍鏡下觀察拍照留存,作為售后依據(jù),否則默認(rèn)收到貨后狀態(tài)良好。